9 janvier 2018 | Sage Journals | Découverte d'agonistes et d'antagonistes du récepteur 2 activé par la protéase dans une chimiothèque codée sur l'ADN grâce à la stabilisation mutationnelle de la cible
La découverte de ligands par la sélection par affinité de chimiothèques codées par l'ADN dépend de la qualité et de la concentration de la protéine cible. Les récepteurs couplés aux protéines G (RCPG) et d'autres cibles membranaires peuvent être difficiles à isoler dans leur état fonctionnel et à des concentrations élevées, et ont donc constitué un défi pour la sélection par affinité. Nous rapportons ici une campagne de sélection réussie contre le récepteur 2 activé par la protéase (PAR2). En utilisant un mutant thermostabilisé de PAR2, nous avons effectué une sélection par affinité en utilisant notre bibliothèque de >100 milliards de composés codés dans l'ADN. Nous avons observé un certain nombre de ligands putatifs enrichis lors de la sélection, et le profilage cellulaire ultérieur a révélé que ces ligands comprenaient à la fois des agonistes et des antagonistes. La série d'agonistes présentait des similitudes structurelles avec des agonistes connus. Les antagonistes se lient à un nouveau site de liaison allostérique sur la protéine PAR2. Ce rapport sert à démontrer que la sélection d'affinité sans cellule contre les RCPG peut être réalisée avec des cibles protéiques stabilisées mutantes.
